Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中日渐扩展

从第一次显现家兔自身免疫球蛋白到显现1改型白血病医学征状的成果率在成年人时期就有很好的说明了，多个家兔自身免疫球蛋白乙型肝炎的成年人出处70%在血清转换后10天内患有白血病，而随访15年的成年人这一数目增大到84%。相比较之下，占医学1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的肺癌机制还不会得到充分的科学研究。

愈加多的人开始用到已具体系统来定义1改型白血病的成果：生殖在显现多种家兔自身免疫球蛋白时带入第1阶段性，显现血糖异常时带入第2阶段性，显现征状时带入第3阶段性。一些多发家兔自身免疫球蛋白乙型肝炎的生殖，在1期和2期，成果很慢，并的发展为肺癌的1改型白血病。我们前说明了了一第一组在首次侦测到多种家兔自身免疫球蛋白样本后至不够少10年无白血病的极慢成果者，这第一组病人人数不够少，但特征极为明确。随后，我们发现家兔自身抗原特异性CD8+T细胞内底物在成果很慢的病人里基本不存有，但在近期肺癌和长期存有的白血病病人里很不够容易侦测到。这可能推断结论，与成果病人相比较，这些病人自身免疫底物的调节增强。

早期科学研究推断结论，尽管调节性T细胞内(Treg)数量正常，但白血病病人存有一些功能缺陷，其里包括对IL-2的底物能力降低。此外，白血病病人里的畸变CD4+T细胞内可能对调节不够具抵抗性，平庸为畸变T细胞内的诱导减弱，自然环境消除的Treg和体外消除的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内里IL-2底物减弱。本科学研究的目标是说明了了CD4+调节性T细胞内(Treg)在一小群极很慢成果者里的特征，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群为基础的垂直科学研究，在21岁请注意确诊的病人亲属里检查1改型白血病的危险诱因。我们前说明了了长期很慢成果者的特征，他们保持多重家兔自身免疫球蛋白乙型肝炎超过10年，但不会显现白血病的医学征状，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无白血病并主动获取大量血液样本的很慢成果者纳入T和B细胞内功能分析。在目前的科学研究里，8名慢成果者(SP第一组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁错综复杂的家兔自身免疫球蛋白乙型肝炎。所有的参与者都属于1改型白血病成果的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身免疫球蛋白对某些抗原的乙型肝炎底物，然而，一名病人已经属于2期至不够少6年，但不会显现医学征状，一名病人被诊断为白血病，该实验者72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在科研人员里对该NAD展开了之外评估。复合外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内忍术和T细胞内诱导测试评估NAD里Treg的高频率、表改型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类检验、表征和重返)展开无委派聚类分析，评估Treg表改型。

结果：与健康NAD相比较，来自慢成果体的思绪CD4+T细胞内的委派聚类揭示，激活的思绪CD4+ Treg高频率增大，与糖皮质激素诱导的TNFR之外蛋白(GITR)阐释增大有关。一名HbA1c急剧下降的病人与成果很慢者和匹配的实验第一组相比较，Treg五音相同。功能分析推断结论，与健康NAD相比较，来自很慢成果体的Treg介导的CD4+畸变T细胞内诱导明显受到破坏。平庸为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134阐释的诱导增大。

示意图1 险恶的表改型分析揭示，CD4+Treg亚改型在慢成果描述符里增大。由FlowSOM分解的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据记号物阐释检验出10个元簇:思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内核Treg_1;内核Treg_2;内核Treg_3;和内核Treg_4。(a)用到9个相同Treg记号分解的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，不够大的元集群(10个元集群)在节点第一组周围上色。每个节点里的饼示意图回可不单个记号的阐释级别。(b)每个元聚类的热示意图，以揭示主体记号阐释。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)分解示意图，以及FlowSOM标识的每个元簇的较厚。(e-l)相比较丰度为每个metacluster箱两条路线示意图(丰度> 0.05%)具体为HD和SP第一组:内核Treg_2 (e),内核Treg_3 (f),内核Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞内(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞内(l)。粉红色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 用到CITRUS的预测模改型证实，Treg高频率的增大是成果很慢的标志。PG之外联(a - f)和葡萄分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的特色示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富含，然后通过HLA-DR和GITR阐释展开复合，精心设计FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及NADSP 606(粉红色)里CD25+ cd127的高频率汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+之外联偏序的箱两条路线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(内核Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(内核Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(内核Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+内核T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3阐释风速着色，箭头突出的簇被标识为SP和HD描述符错综复杂的相同。(j)箱两条路线示意图揭示了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组里，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相比较丰度(数目)。(k)直方示意图揭示每个簇的表改型(黄色)和Treg记号相比较阐释与或多或少阐释(粉红色);上列，内核Treg_3;下面一行，内核Treg_4。或多或少与所有其他簇里记号的阐释有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取记号秩检验

示意图3 与健康献血者相比较，成果很慢者思绪treg的GITR增大。每个思绪CD4+T细胞内元簇(思绪T细胞内_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞内;HLA-DR + GITR +思绪T细胞内;内核Treg_2;内核Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个阐释记号的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的阐释热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR阐释串联，揭示直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon选取记号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有NAD包括，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR阐释，从PG之外联，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(粉红色)串联，揭示直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取记号秩检验

示意图4 来自很慢成果的CD4+ treg细胞内操纵畸变CD4+T细胞内的能力降低。SP第一组用粉红色的两条路线和橘色回可不，HD第一组用黑色的两条路线和橘色回可不，粉红色的两条路线/橘色回可不NADsp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被记号为CFSE, Treg按掩蔽的数目起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养出来3天后展开流式细胞内忍术侦测。(a-d)与CD4+；也者相比较可不的treg培养出来(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者培养出来。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导总和(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导总和。用到乙型肝炎对照(激活的自发细胞内包含treg)计算诱导总和。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 畸变CD4+T细胞内对很慢成果的T细胞内活化的诱导不够敏感性。SP第一组用粉红色的两条路线和橘色回可不，HD第一组用黑色的两条路线和橘色回可不，粉红色的两条路线/橘色回可不NADsp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel记号，treg按掩蔽的数目起始。用抗CD3 /28微珠活化细胞内，培养出来3天后展开流式细胞内忍术(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同培养出来。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导前年(b)。(c,d) CD25诱导前年(c)和CD134诱导前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培养出来里的阐释。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们推断的结论是，来自很慢成果子的活化思绪CD4+Treg在GITR阐释里得到了扩充和丰富，阐释了进一步科学研究Treg在1改型白血病风险生殖里的异质性的必要性。

原文典故：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28